Teška i hidrofobna sinteza peptida

Teška sinteza peptida|Prilagođavanje hidrofobnih peptida|Teška sinteza peptida|Cluster Sequence Synthesis|Nauka{0}}Peptid

Peptidna sekvenca previše hidrofobna? Lako agregirati? Više parova disulfidnih veza? Usluge nauke-Teška sinteza peptida i sinteza hidrofobnih peptida specijalizovane su za sve vrste "ne mogu to obaviti". 20 godina iskustva, specijalni sistemi rastvarača, stabilna isporuka. Slobodno nas kontaktirajte.

Koje vrste peptida se smatraju "teškim"?
Pošto se bavim sintezom peptida već 20 godina, vidio sam sve vrste teških peptida. Kada nam dođu kupci, već su pitali nekoliko kompanija, a odgovor je ili "Ne mogu" ili "Probaj, nema garancije".

Peptid sa jakom hidrofobnošću: transmembranski region, signalni peptid, hidrofobna aminokiselina, kada se sintetiše, biće spojen zajedno na smoli, a aminokiselina iza njega neće moći da uđe.
Peptidi koji se lako agregiraju, kao što su amiloidni i antimikrobni peptidi, nakupljaju se kada se sintetiziraju i začepljuju kolonu kada se pročišćavaju.
Peptidi sa više parova disulfidnih veza: više od tri para, jedan pogrešan korak u redoslijedu uparivanja i cijeli molekul je uništen.
Dugi peptid: više od 60 aminokiselina, svaki korak prinosa se smanjuje, a na kraju ništa ne ostaje.
Kompleksna kombinacija modifikacija: fosforilacija, fluorescencija, ciklizacija i uslovi koji se međusobno bore.
Možemo ih sve uzeti, i to nije "pokušati", već "imati plan".

1. Hidrofobni peptidi: sa specijalizovanim sistemima rastvarača
Poteškoća hidrofobnih peptida leži u činjenici da se ne mogu rastvoriti u konvencionalnim rastvaračima, a kada se sintetizuju, peptidni lanac se "skuplja" na smolu, što onemogućava ulazak aminokiselina iza njega.

Naše rješenje:
Posebna kombinacija rastvarača: DMF, NMP, DCM mješoviti sistem, plus malo tečnog sredstva za oslobađanje, tako da se peptidni lanac održava rastegnutim.
Optimizacija temperature: neke reakcije su bolje na 40 stepeni od sobne temperature, neke se moraju spustiti na 0 stepeni, isprobali smo ih jednu po jednu.
Izbor smole: Koristite smolu visoke rastvorljivosti za hidrofobne peptide kako biste ostavili dovoljno prostora za peptidne lance.
Solubilizirane etikete: Ako ne možete, dodajte hidrofilnu etiketu i odrežite je nakon sinteze.

Pravi slučaj: 35aa transmembranski peptid, hidrofobne aminokiseline čine 70%, kupac je tražio tri kompanije ne može učiniti. Promenili smo sistem rastvarača i dodali solubilizirajuću etiketu, konačno je čistoća bila 92%, a kupac je glatko uradio studiju strukture.

2. Više parova disulfidnih veza: nema sreće, strategija
Što je više disulfidnih veza, to ih je teže upariti. Dva para su u redu, ali tri ili više para, i jedan pogrešan korak i sve je gotovo.
Naša strategija:
Ortogonalna zaštita: Cys se može otvoriti i upariti u koracima koristeći različite zaštitne grupe, kao što su Trt, Acm, tBu.
Optimizacija oksidacionih uslova: vazdušna oksidacija, oksidacija glutationa, oksidacija joda, različite metode za različite peptide.
Srednji QC: Nakon svakog para, uzmite uzorak za MS i potvrdite uparivanje prije nego što nastavite.
MS/MS potvrda (opciono): konačni raskid-sekundarnom masenom spektrometrijom da se vidi gdje su zapravo spojene disulfidne veze.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% čistoće, pravilno uparene disulfidne veze, a kristalna struktura je naknadno riješena od strane kupca.

3. Peptidi skloni agregaciji{1}}: sintetiziraju se tokom odbrane
Neki peptidi prirodno vole da se agregiraju, kao što je amiloidni protein i antibakterijski peptid. Počinju da se agregiraju kada se sintetiziraju, blokiraju kolonu kada se pročiste i ne mogu se otopiti kada su u ruci.
Naše rješenje:
Pseudoprolin: Pseudoprolin se uvodi na Ser/Thr položaju da poremeti tendenciju agregacije i da se vrati nazad nakon sinteze.
Segmentna sinteza: Previše polimerizovani peptidi se izrezuju na nekoliko segmenata i sintetiziraju odvojeno, a zatim se ponovo povezuju na kraju.
Optimizacija uslova prečišćavanja: visoka temperatura, kiseli pH, dodavanje organskih rastvarača kako bi se pronašli uslovi koji ga čine ne-polimerizirajućim.

4. Kompleksne kombinacije modifikatora: uslovi bez borbi
Neki peptidi imaju više zahtjeva: fosforilaciju, fluorescentno obilježavanje i ciklizaciju. Ove modifikacije mogu biti u sukobu jedna s drugom - na primjer, fosforilacija je kiselo-fobična, fluorescentno označavanje je svjetlo-fobno, a ciklizacija zahtijeva specifičan pH.
Naš pristup:
Dizajn strategije očuvanja: koje obrezivanje prvo uraditi, koje kasnije, dizajnirano unaprijed.
Ortogonalni uslovi: Uslovi svakog koraka reakcije ne utiču na već napravljene modifikacije.
Srednji QC: Nakon svakog koraka modifikacije, uzmite uzorak kako biste bili sigurni da je ispravno urađen prije nego što nastavite.

5. Čistoća: Ovisno o tome šta radite s njim

Svaki peptid je praćen HPLC i MS izvještajem, čineći podatke o čistoći transparentnim.

1. Radimo ovo već 20 godina
Teška sinteza peptida nije nešto što bilo ko može. Tokom godina, obradili smo mnogo teških peptida: transmembranske proteine, virusne fuzione peptide, konotoksine, amiloidne proteine, antimikrobne peptide, itd. Imamo dobru predstavu o tome koje sekvence su podložne problemima i koji uslovi mogu da ih spasu. Barem ne morate probati svaki od njih ako dođete kod nas na tešku i hidrofobnu sintezu peptida.

2. Nije "pokušaj", već "imaj program".
Mnoge kompanije uzimaju teške peptide i kažu: "Pokušaćemo, ali ne garantujemo". Ne igramo na taj način. Prije nego što prihvatimo narudžbu, procijenićemo sekvencu, koliki je udio hidrofobnih aminokiselina, da li postoji neka poznata tendencija agregacije, koliko parova disulfidnih veza i da li je modifikacija složena ili ne. Nakon evaluacije, reći ćemo vam: koja je stopa uspješnosti i koliko dugo traje ciklus.

Mi ne primamo naređenja koja se ne mogu izvršiti, već moramo predati naređenja koja smo primili.

3. Specijalizovani sistemi rastvarača za hidrofobnost
Hidrofobni peptid je naša jača strana. Ako se konvencionalni rastvarač ne može otopiti, promijenit ćemo otapalo; ako konvencionalna temperatura ne reaguje, mi ćemo podesiti temperaturu; ako konvencionalna smola ne izdrži, promijenit ćemo smolu. Tu je i solubilizirajuća etiketa kao povratni izlaz.

4. Više parova disulfidnih veza, korak-po{2}}korak
Ako postoji više od tri para disulfidnih veza, pristupit ćemo korak-po-pristupom: prvi korak je zaštita A i otvaranje prvog para; zaštiti B i otvori drugi par; zaštitite C i otvorite treći par. Nakon svakog koraka uzimamo uzorke za MS i potvrđujemo uparivanje prije nego što nastavimo dalje. Konačno, MS/MS će biti pokvaren i verifikovan, a podaci će vam biti dati bez vašeg nagađanja.

5. Kontrola kvaliteta: podaci na svakom koraku
Kontrola kvaliteta teških peptida mora biti pažljivija:
Srednji QC: Nakon svakog fragmenta i svakog koraka modifikacije, prvo izmjerite čistoću i molekularnu težinu.
Krajnji proizvod: HPLC za čistoću, MS za molekulsku težinu.
Test rastvorljivosti: Navedite preporučene rastvarače i metode solubilizacije, tako da ne dobijete peptide koji se ne rastvaraju.
Radeći tešku i hidrofobnu sintezu peptida, podaci govore sami za sebe, svaki korak se može pratiti.

• Oblik isporuke: liofilizirani prah, epruvete za centrifugiranje ili bočice.
• Prateća dokumentacija: COA (HPLC profil + MS spektar), izvještaj o sintezi (opciono).
• Opcioni testovi: sadržaj peptida, endotoksin, vlaga, sastav aminokiselina, test rastvorljivosti.
• Prilagođeno pakovanje: porcioniranje i označavanje prema vašim zahtjevima.
• Svaki težak i hidrofobni proizvod za sintezu peptida pregledava se kako bi se osiguralo da je redoslijed ispravan i čistoća na standardnom nivou prije nego što se pošalje.

Bilo da su vas drugi odbili ili ne možete to učiniti u vlastitoj laboratoriji, možete razgovarati s nama. Ako tražite naučne-peptide za tešku i hidrofobnu sintezu peptida, barem ne morate pokušavati jedan po jedan.

trebaš mi da mi kažeš:
Sekvenca peptida (ili informacija o ciljanju)
Da li vam je neko drugi to prije radio? šta je rezultat?
koliko (miligrama)
zahtjevi za čistoćom

Kada to želiš?

Dajte vam procjenu izvodljivosti i ponudu programa u roku od 24 sata.