Nečistoće semaglutida

Nečistoće semaglutida|Kontrola nečistoća simeglutida|Prilagođena sinteza nečistoća i potvrda strukture|Nauka{0}}Peptid

Kontrola nečistoća Soma Lutida (Simeglutida) - za GLP-1 studija kvaliteta lijeka, generička prijava lijeka. Nauka-Peptid pruža prilagođenu sintezu nečistoća povezanih sa Soma Lutidom, uključujući nedostajuće peptide, oksidirane nečistoće, proizvode za piling masnih kiselina, podatke o PEG-strukturi, podaci povezani sa strukturnim lancima, itd. Možemo podržati vaše istraživanje profila nečistoća. Dobrodošli da nas kontaktirate.

Semaglutid (također poznat kao Semaglutid) je ovih godina bio u plamenu. Novo Nordisk se oslanja na njega kako bi gurnuo tržišnu vrijednost drugom u svijetu, domaćim proizvođačima generičkih peptida, koji gotovo da i ne bulje u njega. Oralni oblik doziranja i dozni oblik za injekcije su velika tržišta. Nakon isteka patenta, ko može prvi da uradi kvalitetno istraživanje, ko će imati priliku da zgrabi prvi generički.

 

Međutim, kvalitetna studija somatostatina je, iskreno govoreći, teža od ispitivanja mnogih peptida. To je 31-peptid sa lancem masnih kiselina (oktadekandioična kiselina) i PEG linkerom. Ova struktura određuje da je njen spektar nečistoća posebno bogat - peptidima koji nedostaju, oksidiranim nečistoćama, produktima izlučivanja masnih kiselina, nečistoćama vezanim za PEG lanac, svaki dimeri moraju imati kontrolu, svaki mora biti čist. Posebno je PEG lanac, koji se ne nalazi u običnim peptidima, jedinstven za somalutid.

 

Sakupili smo mnogo iskustva u sintezi kompleksnih peptidnih nečistoća. Specijalizirali smo se za proučavanje somatostatina i znamo koje su poteškoće u njegovom profilu nečistoća i koje su bitne kontrolne stavke. Možemo prilagoditi sintezu različitih kontrola nečistoća semaglutida prema vašim potrebama, sa podacima o strukturnoj potvrdi, i pomoći vam da uspostavite metodu, tako da će vam biti manje vjerovatno da ćete dobiti dodatak prilikom podnošenja.

Molekularna struktura somatostatina određuje da je njegov profil nečistoća mnogo složeniji od profila običnih peptida. Kada radimo studije nečistoća, uglavnom se fokusiramo na ove kategorije:

Nedostaje peptid
31 aminokiselina, od kojih svaka nedostaje tokom procesa sinteze, je nečistoća. Vremena retencije peptida koji nedostaju na HPLC-u bila su široko rasprostranjena, sa različitim polaritetima peptida koji nedostaju na različitim pozicijama. Neki nedostaju na N-terminusu, neki na sredini, a neki blizu mjesta vezivanja za masne kiseline. Primili smo narudžbu od kupca koji je tražio desetak nedostajućih peptida na različitim pozicijama kako bismo locirali sve moguće nečistoće koje nedostaju u njihovom procesu.

Oksidirajuće nečistoće
Somalutid u svom nizu ima metionin (Met), koji je podložan oksidaciji u sulfoksid, a zatim u sulfon. Oksidirane nečistoće se često pojavljuju u studijama stabilnosti i rastu nakon određenog vremenskog perioda. Uradili smo poređenje, u ubrzanim uslovima za mesec dana, vrh oksidacije može porasti na više od 0,3%, bez kontrole.

Proizvodi za uklanjanje masnih kiselina
Bočni lanac masne kiseline (oktadekandioična kiselina) somatostatina je vezan za lizin preko povezivača, a ova modifikacija se može djelimično osloboditi tokom sinteze ili skladištenja. Što je još problematičnije, do osipanja može doći na različitim lokacijama - između masne kiseline i povezivača, te između linkera i peptida -, što rezultira različitim nečistoćama. Sintetizirali smo nekoliko nečistoća povezanih s masnim kiselinama-za naše kupce, u rasponu od potpunog osipanja do samo malog dijela.

Nečistoće povezane sa PEG lancem
Ovo je najspecifičnija vrsta nečistoće u somatostatinu. Ima PEG (polietilen glikol) linker, a PEG lanac se može slomiti, skratiti ili polimerizirati tokom sinteze, što rezultira nizom povezanih nečistoća. Ove nečistoće se ne nalaze u običnim peptidima, ali su jedinstvene za somatostatin i teško ih je proučavati u kvalitetnim studijama. Napravili smo razne varijante brisanja PEG lanca, skraćivanja PEG lanca i oksidacije PEG lanca.

Dimeri/polimeri
Dva ili više molekula somatostatina se grupišu kako bi formirali dimer ili više. Molekularna težina dimera je dvostruko veća od glavnog pika, a često je široki pik na HPLC-u, tako da se mora posebno odvojiti i pročistiti prije nego što se može koristiti kao kontrola. Uradili smo pripremu dimera i bilo je potrebno nekoliko rundi prečišćavanja da bi se postigla čistoća veća od 95%.

Deamidirane nečistoće
Asparagin (Asn) i glutamin (Gln) se lako deamidiraju pod kiselim ili zagrijavanjem, što rezultira izomerima. Postoji nekoliko Asn i Gln u nizu somatostatina, a nečistoća deamidacije se često pojavljuje u testu prisilne degradacije, tako da se kontrolni proizvod mora koristiti za lociranje nečistoće.

Diastereoizomeri
Tokom dugolančane sinteze, pojedinačne aminokiseline mogu biti podvrgnute racemizaciji, što rezultira dijastereoizomerima. Sadržaj ove vrste nečistoće obično nije visok, ali će stručnjaci pitati prilikom deklarisanja, a za potvrdu je bolje imati kontrolni proizvod.

Mnoge od ovih nečistoća se ne mogu kupiti i potrebno ih je sintetizirati po narudžbi. Već smo uradili dosta projekata na prilagođavanju nečistoća somatostatina, pokrivajući sve gore navedene kategorije.

Brisanje serije peptida
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, uz MS i NMR potvrdu. Sintetizirali smo skup peptida sa razmakom od 5 aminokiselina od N-terminala do C-terminala.

Oksidirajuće nečistoće
Met in Somatostatin is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. The purity of the product is >95% i možemo dati LC-MS spektar za potvrdu stepena oksidacije. Sulfoksid i sulfon se odvajaju HPLC-om, a možemo i jedno i drugo.

Proizvodi za uklanjanje masnih kiselina
Ovo je glavni fokus nečistoća somalutida. Lanac masnih kiselina može biti potpuno ili djelomično pomjeren. Možemo sintetizirati niz varijanti za različite pozicije osipanja. U jednom od najkomplikovanijih projekata koje smo ikada radili, kupac je od nas tražio da sintetiziramo nečistoću sa 6 ugljika koji nedostaju u lancu masnih kiselina, a trebalo nam je dva mjeseca da to ispravimo.

Nečistoće povezane sa PEG lancem
Ovo je jedna od najtežih nečistoća somatostatina, a to je i naša snaga. PEG lanac može nedostajati, skratiti se, prekinuti, oksidirati, a mogu se proizvesti razne varijante. Uradili smo nečistoću sa potpuno nedostajućim PEG lancem (tj. de-PEGilirani somatostatin), varijantu sa prepolovljenom dužinom PEG lanca i proizvodom sa oksidiranim PEG lancem. Kupcu su date ove kontrole, a spektar nečistoća povezanih s PEG- je u potpunosti utvrđen.

Dimer
Dimeri formirani unakrsnim-povezujućim ili ne-kovalentnim interakcijama mogu se pripremiti različitim metodama i izolovati i pročistiti kako bi se osigurale kontrole visoke čistoće. Pročišćavanje dimera je naporno, ali imamo iskustvo da znamo kako da odvojimo monomere.

Deamidirane nečistoće
Za Asn i Gln mjesta u sekvenci, možemo pripremiti kontrole deamidiranih nečistoća prisilnom degradacijom ili ciljanom sintezom. Razlika u molekularnoj težini nakon deamidacije je samo 1, što nije lako razlikovati pomoću MS-a, pa obično koristimo NMR ili posebne kromatografske uvjete za potvrdu.

Dther prilagođene nečistoće
Ako u svom istraživanju pronađete novu nepoznatu nečistoću, možemo vam pomoći da analizirate strukturu i sintetizirate je. Pošaljite nam uzorak, mi ćemo uraditi LC-MS analizu, spekulirati strukturu, zatim usmjerenu sintezu, a zatim uporediti vrijeme zadržavanja i maseni spektar da potvrdimo saglasnost. Ovaj proces smo radili mnogo puta i stopa uspješnosti je prilično visoka.

Razvoj i validacija analitičkih metoda
Prilikom postavljanja HPLC ili LC-MS metode, potrebna je kontrola nečistoća za lokalizaciju, određivanje razdvajanja, verifikaciju linearnog opsega i oporavak. Bez kontrole, validaciji metode nedostaje dio. Mnogi kupci traže od nas da prvo napravimo nekoliko ključnih nečistoća kako bismo postavili metodu, a zatim polako nadoknadili ostatak.

Heterogena masena spektrometrija
Kada se generički lijek deklarira, potrebna je sveobuhvatna kvalitativna i kvantitativna analiza procesnih nečistoća i proizvoda razgradnje. Kontrolni proizvod mora potvrditi lokaciju, sadržaj i strukturu svake nečistoće. Vidjeli smo da je deklaracija informacija poslana da se nadoknadi, devet puta od deset je nečistoće ovog komada nije razumjelo.

Studije stabilnosti
U dugotrajnoj-stabilnosti i ubrzanim testovima potrebno je utvrditi koji su proizvodi razgradnje dominantni i kakav je trend sadržaja. Uz kontrolu nečistoća, moguće je precizno kvantificirati i pratiti. Kupac je radio na stabilnosti preparata somatostatina i otkrio da je vrh razgradnje brzo rastao u ubrzanim uslovima, pa smo ga analizirali pomoću MS-a i sintetizirali ga da potvrdimo strukturu, a onda je kupac osjetio olakšanje da ga prijavi.

Testiranje puštanja serije
Nakon komercijalizacije, svaka serija API-ja ili formulacije mora biti testirana na dotičnu supstancu. Kontrole nečistoća su suštinski alati za testiranje oslobađanja.

Informacije o deklaracijama generičkih lijekova
Studije nečistoće su ključni dio informacija o arhiviranju. Pružanje potpunog profilisanja nečistoća i kontrolnih podataka značajno smanjuje rizik od ponovnog objavljivanja.

Slučaj 1: Farmaceutska kompanija, program generičkih lijekova Somalutide
Oni razvijaju generičku verziju somatostatina i potreban im je kompletan set kontrola nečistoća za validaciju metode. Za njih smo prilagodili 15 nečistoća: 6 peptida koji nedostaju, 2 oksidirane nečistoće, 1 dimer, 2 proizvoda za piling masnih kiselina, 3 nečistoće povezane s PEG lancem i 1 nečistoća od deamidiranja. Čistoća svake je bila iznad 95%, sa MS i NMR podacima. Menadžer projekta je rekao: "Nečistoće somalutida su složenije od drugih peptida, posebno onog PEG-a, za kojim smo tražili brojne kompanije, ali su svi rekli da to ne mogu učiniti. Ali vi ste uspjeli sve, a podaci su bili potpuni, što je bila velika pomoć." Nakon toga, validacija njihove metode je uspješno završena i oni se sada pripremaju za podnošenje.

Slučaj 2: CRO, posebna studija o nečistoćama u PEG lancu
Oni su preduzeli kvalitetan istraživački projekat o somatostatinu, koji je zahtevao sveobuhvatnu analizu nečistoća povezanih sa PEG lancem. Sistematski smo sintetizirali nečistoće vezane za PEG-: potpuno odsustvo PEG lanca, prepolovljenje dužine PEG lanca, oksidacija krajeva PEG lanca i razbijanje PEG lanca na dva dijela. sintetizirao ukupno 8 nečistoća povezanih s PEG-. Klijent je koristio ove kontrole da uspostavi kompletan set metoda detekcije PEG nečistoća, što je postalo vrhunac njihovih podataka u arhiviranju.

Slučaj 3: Studije stabilnosti, biotehnološka kompanija
Radili su studiju stabilnosti formulacije somatostatina i otkrili da se sadržaj proizvoda razgradnje brzo povećava u ubrzanim uvjetima, ali nisu znali što je to. Analizirali smo uzorak pomoću LC-MS, pretpostavili da se radi o nečistoći masne kiseline koja izlučuje na određenoj lokaciji, a zatim ga sintetizirali na ciljani način i potvrdili poređenjem. Oni su uspostavili test koristeći ovu kontrolu i precizno pratili trend ovog proizvoda razgradnje. Kasnije, prilikom podnošenja izvještaja, ovaj dio podataka je istaknut od strane stručnjaka, a zbog solidnih podataka nije izdata naknada.

Somatostatin je super popularan proizvod, ali proučavanje nečistoća je delikatan posao, posebno nečistoće povezane s PEG lancem i proizvodi za piling masnih kiselina, s kojima mnogi proizvođači ne mogu podnijeti. Ako se bavite kvalitetnim istraživanjem ili generičkim razvojem somatostatina, i trebate kontrolu nečistoća, dobrodošli da razgovarate s nama. Uradili smo mnogo posla, znamo koje su poteškoće i znamo kako da ih prevaziđemo.