Tirzepatid Impurities

Tirzepatid Impurities|Kontrola nečistoća tilpeptida|Prilagođena sinteza nečistoća i potvrda strukture|Nauka{0}}Peptid

Kontrola nečistoća tirzepatida - za GLP-1/GIP dual-istraživanje kvaliteta lijeka, generičko izvješćivanje o lijekovima.Nauka-Peptid pruža prilagođenu sintezu nečistoća povezanih s tilpeptidom, uključujući peptide za brisanje, oksidirane nečistoće, masne kiseline, podatke za eksfolijaciju itd., možemo podržati vaše proizvode za piling, možemo podržati vaše podatke za eksfolijaciju, studija spektroskopije nečistoća sa podacima za potvrdu strukture. Dobrodošli da nas kontaktirate.

Tirzepatid (Tirzepatide) je GLP-1/GIP dvostruki agonist koji je Eli Lilly smislio, i bio je u punom zamahu ove dvije godine. Ima dobar učinak snižavanja šećera i snažnog smanjenja težine, a naziva se nadograđenom verzijom "čudotvornog lijeka za mršavljenje". Domaći proizvođači peptidnih generičkih lijekova, mnogi se zagledaju u to - nakon isteka patenta, tko će prvi proći kroz kvalitetna istraživanja, tko će imati priliku zgrabiti prvi generički.

 

Međutim, kvalitet tilpeptida nije tako lako proučavati. Složeniji je od simetikona, sa 39 aminokiselina, bočnim lancem masnih kiselina (eikozandioična kiselina) i povezivačem. Nečistoće koje se mogu pojaviti tokom procesa sinteze su mnogo veće od onih kod običnih peptida. Nedostajuće peptide, oksidativne nečistoće, proizvodi izlučivanja masnih kiselina, dimeri, nečistoće povezane s linkerom-sve moraju imati kontrolu, svaka mora biti čista.

 

Sakupili smo mnogo iskustva u sintezi kompleksnih peptidnih nečistoća. Specijalizirali smo se za proučavanje tilpeptida i znamo koje su poteškoće u njegovom profilu nečistoća i koje su bitne kontrolne stavke. Možemo prilagoditi sintezu raznih kontrola nečistoća tilpeptida prema vašim potrebama, sa podacima o potvrdi strukture, i pomoći vam da uspostavite metodu tako da će vam biti manje vjerovatno da ćete dobiti dodatak prilikom podnošenja zahtjeva.

Molekularna struktura tilpeptida određuje da je njegov profil nečistoća mnogo složeniji od profila općih peptida. Kada radimo studije nečistoća, uglavnom se fokusiramo na ove kategorije:

Nedostaje peptid
39 aminokiselina, od kojih svaka nedostaje tokom procesa sinteze, je nečistoća. Vremena retencije peptida koji nedostaju na HPLC-u bila su široko rasprostranjena, sa različitim polaritetima peptida koji nedostaju na različitim pozicijama. Neki nedostaju na N-terminusu, neki na sredini, a neki blizu mjesta vezivanja za masne kiseline. Primili smo narudžbu od kupca za 15 nedostajućih peptida na različitim pozicijama kako bismo lokalizirali sve moguće nečistoće koje nedostaju u njihovom procesu.

Oksidirajuće nečistoće
Met u sekvenci tilpeptida je podložan oksidaciji do sulfoksida, a zatim do sulfona. Oksidirane nečistoće se često pojavljuju u studijama stabilnosti i rastu nakon određenog vremenskog perioda. Uradili smo poređenje, u ubrzanim uslovima za mesec dana, vrh oksidacije može porasti na više od 0,3%, bez kontrole.

Proizvodi za uklanjanje masnih kiselina
Ovo je nečistoća jedinstvena za tilpeptid. Njegov bočni lanac masne kiseline (eikosandioična kiselina) je vezan za lizin preko povezivača, a ova modifikacija se može djelimično osloboditi tokom sinteze ili skladištenja, što rezultira uklanjanjem nečistoća sa masnom kiselinom-. Što je još problematičnije, do osipanja može doći na različitim lokacijama - između masne kiseline i povezivača, ili između linkera i peptida -, što rezultira različitim nečistoćama. Sintetizirali smo nekoliko nečistoća povezanih s masnim kiselinama-za naše kupce, u rasponu od potpunog osipanja do samo malog dijela.

Dimeri/polimeri
Dva ili više tilpeptidnih molekula se grupišu kako bi formirali dimer ili više. Molekularna težina dimera je dvostruko veća od glavnog pika, a često je široki pik na HPLC-u, tako da se mora posebno odvojiti i pročistiti prije nego što se može koristiti kao kontrola. Uradili smo pripremu dimera i bilo je potrebno nekoliko rundi prečišćavanja da bi se postigla čistoća veća od 95%.

Nečistoće{0}}povezane sa linkerom
Modifikacija tilpeptida masnom kiselinom koristi linker (npr. -Glu, PEG, itd.), a sam ovaj linker može proizvesti sporedne reakcije tokom sinteze, stvarajući nečistoće sa nedostajućim ili nepotpunim linkerima. Ova vrsta nečistoće se ne nalazi u uobičajenim peptidima, ali je jedinstvena za tilpeptid, koji treba posebno proučavati.

Deamidirane nečistoće
Asparagin (Asn) i glutamin (Gln) se lako deamidiraju pod kiselim ili zagrijavanjem, što rezultira izomerima. Postoji nekoliko Asn i Gln u nizu tilpeptida, a nečistoća deamidacije se često pojavljuje u testu prisilne degradacije, tako da se kontrolni proizvod mora koristiti za lociranje nečistoće.

Diastereoizomeri
Tokom dugolančane sinteze, pojedinačne aminokiseline mogu biti podvrgnute racemizaciji, što rezultira dijastereoizomerima. Sadržaj ove vrste nečistoće obično nije visok, ali će stručnjaci pitati prilikom deklarisanja, a za potvrdu je bolje imati kontrolni proizvod.

Mnoge od ovih nečistoća se ne mogu kupiti i potrebno ih je sintetizirati po narudžbi. Uradili smo mnogo projekata na prilagođavanju nečistoća tilpeptida, pokrivajući sve gore navedene kategorije.

Brisanje serije peptida
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, uz MS i NMR potvrdu. Sintetizirali smo skup peptida sa razmakom od 5 aminokiselina od N-terminala do C-terminala.

Oksidirajuće nečistoće
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95% i možemo dati LC-MS spektar da potvrdimo stepen oksidacije. Sulfoksid i sulfon se odvajaju HPLC-om, a možemo i jedno i drugo.

Proizvodi za uklanjanje masnih kiselina
Ovo je jedna od najtežih nečistoća za rad u tilpeptidu. Lanac masnih kiselina može biti potpuno isključen, ili može biti djelomično isključen (npr. nedostaje posljednjih nekoliko ugljika). Možemo sintetizirati niz varijanti za različite pozicije lanca. U jednom od najkomplikovanijih projekata koje smo uradili, kupac je tražio od nas da sintetiziramo nečistoću sa 8 ugljika koji nedostaju u lancu masnih kiselina, a trebalo nam je dva mjeseca da to ispravimo.

Dimer
Dimeri formirani unakrsnim-povezujućim ili ne-kovalentnim interakcijama mogu se pripremiti različitim metodama i izolovati i pročistiti kako bi se osigurale kontrole visoke čistoće. Pročišćavanje dimera je naporno, ali imamo iskustvo da znamo kako da odvojimo monomere.

Nečistoće{0}}povezane sa linkerom
Povezivač (-Glu, PEG, itd.) može nedostajati ili je nepotpun, što rezultira nizom povezanih nečistoća. Možemo sintetizirati različite varijante sa nedostajućim linkerima, skraćenim linkerima ili neusklađenim linkerima i pomoći vam da izgradite spektre takvih nečistoća.

Deamidirane nečistoće
Za Asn i Gln mjesta u sekvenci, možemo pripremiti kontrole deamidiranih nečistoća prisilnom degradacijom ili ciljanom sintezom. Razlika u molekularnoj težini nakon deamidacije je samo 1, što nije lako razlikovati pomoću MS-a, pa obično koristimo NMR ili posebne kromatografske uvjete za potvrdu.

Ostale prilagođene nečistoće
Ako u svom istraživanju pronađete novu nepoznatu nečistoću, možemo vam pomoći da analizirate strukturu i sintetizirate je. Pošaljite nam uzorke, mi ćemo uraditi LC-MS analizu, zaključiti strukturu, zatim usmjerenu sintezu, a zatim uporediti vrijeme zadržavanja i maseni spektar da potvrdimo saglasnost. Ovaj proces smo radili mnogo puta i stopa uspješnosti je prilično visoka.

Razvoj i validacija analitičkih metoda
Prilikom postavljanja HPLC ili LC-MS metode, potrebna je kontrola nečistoća za lokalizaciju, određivanje razdvajanja, verifikaciju linearnog opsega i oporavak. Bez kontrole, validaciji metode nedostaje dio. Mnogi kupci traže od nas da prvo napravimo nekoliko ključnih nečistoća kako bismo postavili metodu, a zatim polako nadoknadili ostatak.

Heterogena masena spektrometrija
Kada se generički lijek deklarira, potrebna je sveobuhvatna kvalitativna i kvantitativna analiza procesnih nečistoća i proizvoda razgradnje. Kontrolni proizvod mora potvrditi lokaciju, sadržaj i strukturu svake nečistoće. Vidjeli smo da je deklaracija informacija poslana da se popuni, devet puta od deset je nečistoće ovog komada nije razumjelo.

Studije stabilnosti
U dugotrajnoj-stabilnosti i ubrzanim testovima potrebno je utvrditi koji su proizvodi razgradnje dominantni i kakav je trend sadržaja. Uz kontrolu nečistoća, možemo precizno kvantificirati i pratiti. Kupac je radio na stabilnosti pripreme tilpeptida i otkrio da je vrh degradacije rastao vrlo brzo u ubrzanim uslovima, pa smo ga analizirali i sintetizirali od strane MS-a da potvrdimo strukturu, a zatim je kupac s olakšanjem prijavio to.

Testiranje puštanja serije
Nakon komercijalizacije, svaka serija API-ja ili formulacije mora biti testirana na dotičnu supstancu. Kontrole nečistoća su suštinski alati za testiranje oslobađanja.

Informacije o deklaracijama generičkih lijekova
Studije nečistoće su ključni dio informacija o arhiviranju. Pružanje potpunog profilisanja nečistoća i kontrolnih podataka značajno smanjuje rizik od ponovnog objavljivanja.

Slučaj 1: farmaceutska kompanija, program generičkih lijekova za tilpeptide
Oni razvijaju generičku verziju tilpeptida i potreban im je kompletan set kontrola nečistoća za validaciju metode. Za njih smo prilagodili 12 nečistoća: 5 peptida koji nedostaju, 2 oksidirane nečistoće, 1 dimer, 2 proizvoda za izlučivanje masnih kiselina i 2 nečistoće povezane s linkerom. Svaki od njih ima čistoću veću od 95%, a prate ga MS i NMR podaci. Vođa projekta je rekao: "Nečistoće tilpeptida su dvostruko više od ostalih peptida, ali možete ih napraviti sve, a podaci su potpuni, što nam štedi mnogo posla." Kasnije je validacija njihove metode uspješno završena i sada se pripremaju za deklaraciju.

Slučaj 2: CRO kompanija, profiliranje nečistoća
Poduzeli su kvalitetan istraživački projekat tilpeptida, koji je zahtijevao sveobuhvatnu analizu procesnih nečistoća. Poslali su nam uzorke sirovih peptida, a mi smo izvršili LC-MS analizu, zaključili moguće strukture nekoliko nepoznatih nečistoća, zatim ih sintetizirali na ciljani način i uporedili vremena zadržavanja i masene spektre i potvrdili četiri nove nečistoće - dvije od njih su povezane-od kojih su dvije bile povezane s kiselinom, a dvije od njih su bile varijante masnoće. Klijent je koristio ove podatke za preciziranje profila nečistoća i uspješno prošao klijentovo prihvaćanje.

Slučaj 3: Studije stabilnosti, biotehnološka kompanija
Ispitivali su stabilnost formulacije tilpeptida i otkrili da se količina proizvoda razgradnje brzo povećava pod ubrzanim uslovima, ali nisu znali šta je to. Analizirali smo uzorak pomoću LC-MS i pretpostavili da se radi o nečistoći deamidiranja na određenom mjestu Asn, a zatim ga sintetizirali na ciljani način i potvrdili poređenjem. Oni su uspostavili test koristeći ovu kontrolu i precizno pratili trend proizvoda razgradnje. Kasnije, kada su podnijeli izvještaj, ovaj dio podataka stručnjaci su naglasili, a zbog solidnih podataka nije izdata naknada.

Tilpeptid je popularan proizvod, ali proučavanje nečistoća je delikatan posao, posebno proizvodi za piling masnih kiselina i nečistoće povezane{0}}koje mnogi proizvođači ne mogu podnijeti. Ako radite kvalitetno istraživanje ili generički razvoj tilpeptida i trebate kontrolu nečistoća, slobodno nas kontaktirajte. Uradili smo mnogo posla, znamo koje su poteškoće i znamo kako da ih prevaziđemo.